Question

【題目】草甘膦是一種廣譜除草劑，其除草機制是抑制植物體內EPSPS酶的合成，影響植物正常生長，最終導致植物死亡。目前，發現可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉入植物細胞內，獲得的轉基因植物能耐受高濃度的草甘膦。取6株植物，其中，植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經過轉基因處理，但是否成功未知（轉基因處理過程不影響植物正常生長）。圖1為4種限制酶的識別序列和酶切位點，圖2為含有目的基因的DNA片段及其具有限制酶切點。據圖回答：

（1）若A、B、C澆清水，D、E、F澆含有草甘膦的水，則A～F植物中，一定能正常生長的是_________________。

（2）一個完整的基因表達載體除復制原點、啟動子和終止子外，還應包括_________________。若利用酶切法獲得目的基因，最應選擇的限制酶是_________________和_________________。

（3）假設EPSPS基因已被成功轉移到植物F中，但植物F沒有表現出抗性，分析可能的原因_________________。

Answer 1

【答案】A、B、C、E 目的基因、標記基因 MspⅠ SmaⅠ 目的基因沒有成功表達

【解析】

根據題意分析可知：植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經過了轉基因處理，所以A-C澆清水，都能健康成長。F雖經過了轉基因處理，但是否成功還未知，所以D-F澆的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成長，E肯定能健康成長，F未知。一種限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（1）根據題意分析可知：植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經過了轉基因處理，所以A、B、C澆清水，都能健康成長。F雖經過了轉基因處理，但是否成功還未知，所以D、E、F澆的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成長，E肯定能健康成長，F未知。因此肯定能健康成長的是ABCE。

（2）一個完整的基因表達載體包括目的基因、復制原點、啟動子、終止子和標記基因；根據圖1可知，如果用MboⅠ酶進行切割，還會將BamHⅠ酶識別處的片段進行切割，因此只能選擇限制酶MspⅠ和SmaⅠ切割目的基因。

（3）假設EPSPS基因已被成功轉移到植物F中，說明F中已含有EPSPS基因，如果仍沒有表現出抗性，則說明EPSPS基因在受體細胞中沒有表達或表達的酶沒有活性。