Question

【題目】人乳鐵蛋白是一種藥用保健蛋白。下圖表示利用乳腺生物反應器生產人乳鐵蛋白的過程，圖中Tetr表示四環素抗性基因，Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識別序列及切割位點如表所示，請回答以下問題：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識別序列及切割位點

（1）要將人乳鐵蛋白基因插入質粒，若只允許使用一種限制酶，應選擇的限制酶是_________，酶能起催化作用的原理是_________________________________。

（2）據圖分析篩選含有重組質粒的受體細胞首先需要在含___________________（填“四環素”“氨芐青霉素”或“四環素或氨芐青霉素”）的培養基上進行，原因是_________________________________。

（3）若 BamH I酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為___________，對于該部位，這兩種酶___________（填“都不能”或“只有一種能”）切開。

（4）培養出早期胚胎后，科學家欲進行胚胎分割移植，則應該選擇發育良好、形態正常的___________，將其移入盛有操作液的培養皿中，然后用分割針進行分割。

Answer 1

【答案】Sau3AⅠ 可以顯著降低化學反應的活化能 氨芐青霉素 用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會破壞Ampr基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養基上生存下來 都不能 桑椹胚或囊胚

【解析】

題圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的過程，該過程采用了基因工程技術（目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與表達）、動物細胞培養技術和胚胎移植技術。圖中①表示將目的基因導入受體細胞；②表示早期胚胎培養；③表示胚胎移植；④表示產生轉基因牛；⑤表示從轉基因牛中獲取目的基因產物。

（1）根據表中五種酶的識別序列及切割位點可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應選擇限制酶Sau3AI。酶能起催化作用的原理是酶可以顯著降低化學反應的活化能。

（2）據用限制酶Sau3AI切割后會破壞四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質粒的受體細胞可能在含有氨芐青霉素的培養基上生存下來。

（3）根據表格中各種限制酶的識別序列和切割位點可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，這兩種酶都不能切開。

（4）胚胎分割時，應該選擇發育良好、形態正常的桑葚胚或囊胚。