Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫用價值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術獲取重組 HSA 的兩條途徑，其中報告基因表達的產物能催化無色物質 K 呈現藍色。圖二為相關限制酶的識別序列和切割位點，以及 HAS 基因兩側的核苷酸序列。據圖回答下列問題：

（1）在構建基因表達載體時，我們常常用不同的限制酶去切割目的基因和運載體來獲得不同的黏性末端，原因是_____。依據圖一和圖二分析，在構建基因表達載體時下列敘述錯誤的是____

A．應該使用酶 B 和酶 C 獲取 HSA 基因

B．應該使用酶 A 和酶 B 切割 Ti 質粒

C．成功建構的重組質粒含 1 個酶 A 的識別位點

D．成功建構的重組質粒用酶 C 處理將得到 2 個 DNA 片段

（2）PCR 技術應用的原理是_____，在利用該技術獲取目的基因的過程中，以從 生物材料中提取的 DNA 作為模板，利用_________尋找 HSA 基因的位置并進行擴增。

（3）圖一過程①中需將植物細胞與_______________________混合后共同培養，旨在讓__________________整合到植物細胞染色體 DNA 上；除盡農桿菌后，還須轉接到含_____的培養基上篩 選出轉化的植物細胞。

（4）圖一③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，采用最多，也是最為有效的方法是_____。

（5）為檢測 HSA 基因的表達情況，可提取受體細胞的_____，用抗血清 白蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】防止目的基因和質粒自身環化和反向連接 C DNA（雙鏈）復制 引物 農桿菌 T-DNA 無色物質K 顯微注射技術 蛋白質

【解析】

基因工程技術的基本步驟是：目的基因的獲取；基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣；目的基因的檢測與鑒定。

（1）在構建基因表達載體時，常用兩種不同的限制酶切割目的基因和質粒，獲得不同的黏性末端，以防止目的基因和質粒自身環化和反向連接（或使目的基因定向連接到載體上）；

A、由圖中DNA序列和酶切位點序列可知應使用酶B和酶C切割獲取HSA基因，A正確；
B、導入的目的基因時應在T-DNA上，因此Ti質粒應用酶A和酶B切割，因為酶A和酶B切出的黏性末不能互補配對，可以將目的基因連接進去，B正確；
C、據圖一圖二分析可知，成功建構的重組質粒上不再有酶A的識別位點，C錯誤；
D、成功構建的重組質粒用酶C處理能得到2個DNA片段，應是A-C，和C-A片段，D正確。
故選C。
（2）PCR技術應用的原理是DNA（雙鏈）復制，在利用該技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進行擴增。
（3）圖一過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養，利用農桿菌的侵染特性，讓T-DNA整合到植物細胞染色體DNA上；除盡農桿菌后，為了篩選出轉化的植物細胞，利用重組質粒上的報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色的特性，進行篩選，故還須將植物細胞轉接到含無色物質K的培養基上。
（4）圖一③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，通常采用較多的方法是顯微注射技術。
（5）為檢測HSA基因的表達情況，可利用抗原抗-體雜交技術，具體做法是：提取受體細胞的蛋白質，用抗血清白蛋白的抗體做雜交實驗。