Question

【題目】下面是有關土壤中分解尿素的細菌分離和計數的實驗過程，請根據圖回答相關問題：

（1）為分離出土壤中分解尿素的細菌，應該用________________________的培養基進行分離，并加入________指示劑進行鑒別。

（2）若取土樣5g，應加入____________ml的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液。因土壤中細菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成如圖所示的不同濃度的土壤溶液，分別吸取0.1mL的稀釋液涂布到固體培養基上，這種接種方法稱為________________。某同學用該方法接種后，在某個平板上沒有得到菌落，可能的原因是_______________________________________

（3）將接種的培養皿放置在37℃恒溫培養箱中培養24h～48h，觀察并統計符合要求的菌落數，結果如下表，其中_______________倍的稀釋比較合適。

稀釋倍數	103	104	105	106	107
菌落數	>500	367	248	36	18

（4）若需要將分離的菌種進行長期保藏，應使用的方法是_______________________。

Answer 1

【答案】 以尿素為唯一氮源 酚紅 45 稀釋涂布平板法 涂布器灼燒后未冷卻就用于涂布，殺死了菌種 105和106 甘油管藏的方法

【解析】試題分析：本題考查微生物的分離、計數，考查土壤中分解尿素細菌分離原理、方法的理解和應用。

（1）為分離出土壤中分解尿素的細菌，應該用以尿素為唯一氮源的培養基進行分離，并加入酚紅指示劑進行鑒別。尿素分解產生的NH3使指示劑表現為紅色。

（2）取土樣5g，制成稀釋10倍土壤溶液，應加入45ml的無菌水配。分離細菌并計數，應使用稀釋涂布平板法。用該方法接種后，在某個平板上沒有得到菌落，可能的原因是涂布器灼燒后未冷卻就用于涂布，殺死了菌種。

（3）菌落數在30～300之間的平板符合技術要求，據表可知，105和106倍的稀釋比較合適。

（4）長期保藏分離的菌種，應使用甘油管藏的方法。