Question

【題目】與抗生素相比，抗菌肽具有抑菌范圍廣且不易產生耐藥性等優勢，廣泛用于養殖業。

將若干分子的石蛙抗菌肽（SPC）編碼序列按照首尾相連的方式插在質粒pCLY10的卡那霉素抗性基因內部，形成長度為5200 bp的重組質粒pCLY10-nSPC（圖15）。若pCLY10-nSPC經限制酶AccIII處理后產生75 bp和4600 bp兩種長度的DNA片段，則單個SPC由_____________個氨基酸構成；每個重組質粒含有_____________個SPC編碼序列。

（1）根據題干信息判斷，用于導入pCLY10-nSPC的受體細胞類型應為_____________。

A. 抗菌肽敏感、卡那霉素抗性

B. 抗菌肽抗性、卡那霉素抗性

C. 抗菌肽敏感、卡那霉素敏感

D. 抗菌肽抗性、卡那霉素敏感

（2）若選定的受體細胞因缺乏trpA基因不能利用無機氮源合成色氨酸，則應采用兩步法篩選含重組質粒的細胞，其中用于第一步篩選的固體培養基配方應為_____________。

A. 葡萄糖、硫酸銨、生長因子

B. 牛肉膏、酵母粉、NH4Cl、卡那霉素

C. 蛋白胨（包括所有氨基酸）、酵母粉、牛肉膏

D. 葡萄糖、蛋白胨（包括所有氨基酸）、生長因子、卡那霉素

（3）在測試表達產物SPC對枯草芽孢桿菌的殺菌功效時獲得了如圖所示的結果，下列表述中最能解釋這一實驗結果的是_____________和_____________。

A. SPC的濃度與抑菌效果有顯著相關性

B. 圓紙片的直徑與清晰區的大小呈正相關

C. 培養基中瓊脂的含量影響清晰區的大小

D. SPC對枯草芽孢桿菌的年齡具有不同的效應

Answer 1

【答案】25 9 D A A D

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫、PCR、人工合成）；構建基因表達載體（含標記基因、啟動子、終止子、目的基因、復制原點等）；把目的基因導入受體細胞（顯微注射法、農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平和個體水平檢測，前者包括DNA分子雜交、分子雜交和抗原抗體雜交；后者如抗蟲抗病接種實驗）。

由題意可知，該重組質粒pCLY10-nSPC長度為5200 bp，每個SPC編碼序列內部均有1個AccIII酶切位點，若pCLY10-nSPC經限制酶AccIII處理后產生75 bp和4600 bp兩種長度的DNA片段，說明單個SPC編碼序列長度為75bp，SPC中含有的氨基酸的數目為：75÷3=25個；長度為75bp的序列數目為：（5200-4600）÷75=8，又因為AccIII的酶切位點位于SPC編碼序列內部，故4600 bp長度的DNA片段中仍含有1個SPC編碼序列，故該重組質粒含有的SPC編碼序列的數目為8+1=9個。

（1）由圖可知，構建重組質粒時，目的基因插入會破壞卡那霉素抗性基因，故受體細胞中也不能含有卡那霉素抗性基因，即對卡那霉素應該是敏感的；又因為重組質粒中含有抗菌肽基因，可以表達抗菌肽，故受體細胞應該對抗菌肽具有抗性。故選D。

（2）若選定的受體細胞因缺乏trpA基因不能利用無機氮源合成色氨酸，而重組質粒含有trpA基因，只有含有重組質粒或質粒的受體細胞才能在不含有機氮源的培養基上存活，故首先可以選擇不含有機氮源的培養基進行初步篩選。

A、葡萄糖、硫酸銨、生長因子不含有機氮源，A正確；

B、牛肉膏可以提供有機氮源，B錯誤；

C、蛋白胨、牛肉膏均可以提供有機氮源，C錯誤；

D、蛋白胨可以提供有機氮源，D錯誤。

故選A。

（3）由圖可知，在測試表達產物SPC對枯草芽孢桿菌的殺菌功效時，浸有不同濃度SPC的圓紙片產生的透明圈大小不同，說明SPC的濃度與抑菌效果有顯著相關性；另外隨著培養時間的延長，透明圈逐漸變小，SPC對枯草芽孢桿菌的年齡具有不同的效應。故選AD。