Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：

（1）限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有____________和____________。

（2）質(zhì)粒運載體用EcoR I切割后產(chǎn)生的片段如圖：為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR I切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點是____________。

（3）根據(jù)來源的不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即______DNA連接酶和______DNA連接酶。

（4）基因工程中除質(zhì)粒外，________和_______也可作為運載體。

（5）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是________________。

Answer 1

【答案】平末端 ）黏性末端 切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRI切割產(chǎn)生的相同 T4 E·coli 動植物病毒 噬菌體的衍生物 未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱

【解析】

基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體；限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種；DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T4DNA連接酶；基因工程常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒。

（1）限制性核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）切割DNA分子后，產(chǎn)生的片段末端類型有黏性末端和平末端；

（2）目的基因與運載體具有相同的黏性末端才能連接，若用包括EcoRⅠ在內(nèi)的兩種限制酶切割目的基因，則另一種限制酶必須具有的特點是：切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同；

（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即E·coli DNA連接酶（來源于大腸桿菌）和T4 DNA連接酶（來源于T4 D噬菌體）；

（4）基因工程中常用的運載體是質(zhì)粒，此外還有噬菌體的衍生物和動植物病毒；

（5）由于未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱，因此若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，而通常用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，此時細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的通透性增大，容易吸收重組質(zhì)粒。