Question

【題目】酵母的蛋白質含量可達自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業廢甲醇作為碳源進行培養，這樣既可減少污染又可降低生產成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進行大量培養。如圖所示為操作流程，請回答下列問題:

（1）配制培養基時，按照培養基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調節培養基的_________， 及時對培養基進行分裝，并進行_________滅菌。

（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養皿中，在步驟③中，將溫度約_______（填“25℃”、50℃”或“80℃”）的培養基倒入培養皿混勻，冷凝后倒置培養。

（3）挑取分離平板中長岀的單菌落，按步驟④所示進行劃線。劃線應注意的事項有________（答出兩項給分）；步驟⑤中，為使酵母數量迅速增加，培養過程中需保證充足的營養和_________供應。

（4）若要對酵母細胞進行固定化處理，宜采用_________法，常用的固定化材料是_________， 該方法的優點是_________。

Answer 1

【答案】pH 高壓蒸汽 50℃ 為保證無菌操作，接種環使用前都必須滅菌；每次劃線結束后要進行灼燒；每一次在上一次劃線結束處開始；劃線時應避免劃破培養基表面，以免不能形成正常菌落等 氧氣 包埋 海藻酸鈉（明膠、瓊脂糖等均可） 成本低，操作更容易（酶活性不易受外界環境影響）

【解析】

據圖分析，①稱量土樣，里面含有需要分離的酵母菌；②表示梯度稀釋，③④表示平板劃線法，進行純化培養；⑥表示擴大培養，獲得更多的酵母菌。

（1）配制培養基的操作步驟為稱量→溶化→定容→調pH→分裝→包扎→滅菌→倒平板，因此微生物的培養基配制好后應先調 pH，再分裝。常見的滅菌方法有：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌。培養基適宜用高壓蒸汽滅菌法滅菌。

（2）待培養基冷卻到 50℃左右時倒平板。

（3）在劃線過程中，接種針、接種環使用前必須滅菌，以防止雜菌污染培養基；每次劃線結束后要進行灼燒，以清除接種環上殘留菌種；每一次在上一次劃線結束處開始，為了保證接種環上的酵母菌來自于上一次劃線末端，通過增加劃線次數使每一次劃線時的酵母菌數目逐漸減少，最終得到由單個細胞繁殖而來的菌落；劃線時應避免劃破培養基表面，大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落。酵母菌的代謝類型是兼性厭氧型，有氧呼吸可以產生大量能量供酵母菌大量繁殖，所以需供氧使酵母數量迅速增加。

（4）因為細胞體積較大，宜用包埋法對細胞進行固定化處理。常用的固定化材料是海藻 酸鈉、明膠、瓊脂糖等。固定化細胞的優點是成本低，操作容易，酶活性不易受影響等。