Question

【題目】重組酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技術使乙肝病毒相關基因在酵母菌內表達并大規模培養，從而提取制成疫苗。

（1）下圖是獲取目的基因的流程：

①圖中基因組文庫 （小于/等于/大于）cDNA文庫。

②B過程需要的酶是 ；A、C過程中 （可以／不可以）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中 和 為模板直接進行PCR擴增，該過程中所用酶的顯著特點是 。

（2）構建基因表達載體時用限制酶切割DNA后可能產生黏性末端，也可能產生平末端，后者需用 （E·coil／T4） DNA連接酶通過催化 鍵使目的基因與質粒連接起來。為使目的基因在酵母菌細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達載體的 和 之間。

（3）在導入表達載體時常用Ca+處理酵母菌，使其成為 細胞，再與表達載體于緩沖液中混合，在一定的溫度下完成轉化。

（4）為了檢測目的基因是否成功翻譯，可以用 技術，若沒有出現相應的雜交帶，則可能需要用 做探針來檢測是否轉錄出mRNA。

Answer 1

【答案】（1）①大于 ②逆轉錄酶 可以 ③DNA cDNA 耐高溫

（2）T4 磷酸二酯 啟動子 終止子

（3）感受態

（4）抗原-抗體雜交 帶標記的目的基因

【解析】

試題分析：（1）①基因組文庫包含某種生物所有的基因，而cDNA文庫是由mRNA經逆轉錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達，cDNA文庫只包含某種生物部分基因，所以cDNA文庫小于基因組文庫。

②B過程是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶．根據堿基互補配對原則，A、C過程可以使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進行PCR擴增．PCR技術是在高溫條件下進行的，該過程中所用酶要耐高溫。

（2）T4DNA連接酶能連接平末端的磷酸二酯鍵，使目的基因與質粒連接起來．為使目的基因在酵母菌細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達載體的 啟動子和終止子之間。

（3）將目的基因導入微生物細胞時，常用Ca+處理酵母菌，使其成為易于吸收周圍環境中DNA分子的感受態細胞，再與表達載體于緩沖液中混合，在一起的溫度下完成轉化。

（4）檢測目的基因是否整合到受體細胞的染色體上，可通過DNA分子雜交技術進行檢測；檢測目的基因是否轉錄形成mRN，可通過分子雜交技術進行檢測．這兩種技術都需要用帶標記的目的基因做探針．檢測目的基因是否成功翻譯，可以用抗原-抗體雜交技術。