Question

【題目】乙型腦炎和偽狂犬病是豬的兩種常見傳染病。下圖是利用基因工程技術生產能同時預防這兩種病疫苗的流程圖，其中PrM為乙型腦炎的特異性抗原基因，PK、gG、gD為偽狂犬病的主要抗原基因，TK為偽狂犬病的毒性基因，pgG為啟動子，BamH I和EcoR I為兩種限制酶，其識別序列及切割位點分別是G↓GATCC、G↓AATTC。請回答。

（1）過程①所需的酶有________________。下列四種引物中適用于過程①的一對引物是______________。

P1：5' TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG 3'

P2：5' CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG 3'

P3：5' TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG 3'

P4：5' GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG 3'

（2）若健康豬注射蛋白疫苗一段時間后被乙腦病毒感染，請在下圖中畫出病毒感染后體內抗體濃度變化曲線_______________。此時，抗體迅速產生的主要途徑是_______________（用文字和箭頭表示）。

（3）重組偽狂犬病毒中沒有_______，因而不具毒性，注射后不會引發豬患病。

（4）將獲得的病毒疫苗注射到豬體內，可使宿主獲得_______________（特異性）免疫。重組偽狂犬病毒利用宿主細胞內物質合成自身物質，在細胞內________________，持續刺激機體，因此病毒疫苗具有用量小、作用更持久等優點。

Answer 1

【答案】逆轉錄酶、Taq酶（或熱穩定DNA聚合酶）； P1、P4 （病毒抗原→）記憶細胞→漿細胞→抗體 TK（或毒性基因） 體液免疫、細胞 增殖并長期保留

【解析】

據圖分析，過程①表示乙腦病毒的RNA逆轉錄形成相應的目的基因，并通過PCR技術擴增該目的基因；過程②表示構建基因表達載體；過程③表示將重組DNA導入受體細胞（大腸桿菌）的過程。

（1）根據以上分析已知，過程①涉及到逆轉錄和PCR技術，因此需要逆轉錄酶和耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）的催化。根據目的基因兩側的限制酶（BamHI和EcoRI）的識別序列可知，應該選擇的引物是P1和P4。

（2）二次免疫抗體迅速產生的主要途徑是抗原→記憶細胞→漿細胞→抗體。注射蛋白疫苗一段時間后被乙腦病毒感染后體內抗體濃度變化曲線如下圖所示：

（3）根據題干信息已知，TK為偽狂犬病的毒性基因，因此重組偽狂犬病毒中不帶TK基因的優點是不具毒性，注射后不會引發豬患病。

（4）將獲得的病毒疫苗注射到豬體內，一方面病毒中抗原基因在豬細胞中大量表達，誘導豬獲得體液免疫和細胞免疫；另一方面病毒在動物體內可增殖并長期保留，使得病毒投苗具有用量小、作用更持久等優點。