Question

【題目】科研人員采用如圖所示的育種流程獲得抗蟲大豆新品種。請回答：

（1）常用___________技術擴增抗蟲基因，將抗蟲基因插入到T質粒上的T-DNA的原因是____________________________________________。

（2）在構建基因表達載體時為防止酶切產物自身環化，切割質粒時需用___________種限制，酶，酶切后形成的黏性末端序列應___________(填“相同”或“不同”)。

（3）將基因表達載體導入農桿菌時應用___________處理農桿菌，使農桿菌處于___________的生理狀態，這種細胞稱為感受態細胞。

（4）大豆外植體通過誘導形成愈傷組織的過程稱為___________，愈傷組織通過再分化形成植株。該過程利用的原理是___________。

Answer 1

【答案】PCR Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞染色體DNA上 2 不同 Ca2+（CaCl2） 一種能吸收周圍環境中DNA分子 脫分化 植物細胞全能性

【解析】

利用農桿菌轉化法將抗蟲基因導入植物細胞，構建重組Ti質粒時，需將含抗蟲基因的DNA片段插入到Ti質粒DNA的T-DNA區域上，農桿菌侵染植物細胞后，可以使抗蟲基因插入到植物細胞中染色體的DNA上。要把重組質粒導入土壤農桿菌，首先必須用Ca2+處理土壤農桿菌，使土壤農桿菌轉變為感受態，然后將重組質粒和感受態細胞在緩沖液中混合培養完成轉化過程。

（1）常用PCR技術擴增抗蟲基因，將抗蟲基因插入到T質粒上的T-DNA的原因是Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞染色體DNA上。

（2）在構建基因表達載體時為防止酶切產物自身環化，切割質粒時需用2種限制，酶切后形成的黏性末端序列應不同。

（3）將基因表達載體導入農桿菌時應用CaCl2處理農桿菌，使農桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態，這種細胞稱為感受態細胞。

（4）大豆外植體通過誘導形成愈傷組織的過程稱為脫分化，愈傷組織通過再分化形成植株。該過程利用的原理是植物細胞全能性。