Question

【題目】轉基因生物培育成功的關鍵是保證目的基因在受體中的正常表達或抑制特定基因的表達。在這個過程中，根據獲得的目的基因不同、采取的措施不同等，培育時選擇的方法也不相同。回答下列相關問題：

（1）利用乳腺生物反應器獲得胰島素的過程中，為保證通過反轉錄法獲得的胰島素基因能正常表達，在構建基因表達載體時需將獲得的含目的基因的片段連接在__________之間，然后通過_________的方法將基因表達載體導入__________________中。

（2）為降低耐除草劑轉基因水稻通過花粉傳播而引起的環境生物安全問題，一是利用轉入的耐除草劑基因的位置進行控制，如__________________；二是將耐除草劑基因拆分為兩部分，只有兩部分片段同時存在才具有耐除草劑的特性，請提出可行的措施：____________________________________。

（3）下圖中插入顛倒的轉錄區的目的是__________________，其原理可能是顛倒的轉錄區與轉錄區形成的RNA通過_________原則形成雙鏈而無法使轉錄區形成的RNA與核糖體結合。

Answer 1

【答案】（乳腺蛋白基因的）啟動子和終止子 顯微注射 （發育為）雌性個體的受精卵 將耐除草劑基因導入到葉綠體中 將拆分后的基因分別導入不同的個體，獲得純合品系1和品系2，將兩者雜交獲得同時具有兩個片段的個體 抑制轉錄區基因的表達 堿基互補配對

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；

（4）目的基因的檢測與鑒定：

分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術；

個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在構建基因表達載體時需將獲得的含目的基因的片段連接在乳腺蛋白基因的啟動子和終止子之間；將目的基因轉入動物細胞通常采用顯微注射法，受體細胞通常是雌性個體的受精卵。

（2）為降低耐除草劑轉基因水稻通過花粉傳播而引起的環境生物安全問題，一種方法是可以將將耐除草劑基因導入到葉綠體中，形成的花粉就不含有目的基因；另一種方法是將耐除草劑基因拆分為兩部分，只有兩部分片段同時存在才具有耐除草劑的特性，具體措施將拆分后的基因分別導入不同的個體，獲得純合品系1和品系2，將兩者雜交獲得同時具有兩個片段的個體。

（3）在啟動子后插入顛倒的轉錄區可以抑制基因的表達；顛倒的轉錄區與轉錄區形成的RNA二者通過堿基互補配對的原則形成雙鏈從而抑制翻譯過程。