Question

【題目】2011年中國農業大學獲得了表達TLR4基因的抗病綿羊，這種轉基因綿羊加大了對病原體的清除能力。如圖為該TLR4轉基因克隆羊的培育過程示意圖，請據圖回答下列問題：

（1）②過程中是將重組質粒而不是將目的基因直接導入受體細胞的原因是_________。促進重組質粒進入受體細胞與質粒上的______基因有關。羊胚胎成纖維細胞是否已經導入目的基因的篩選方法有______（答出兩點）。

（2）羊胎兒成纖維細胞培養過程中，細胞貼壁生長，數量不斷增多，往往會發生______現象，此時，需要用胰蛋白酶消化組織中的______和細胞外的其他成分，獲得單個的成纖維細胞懸浮液。

（3）③過程中需要對羊胚胎成纖維細胞進行______的特殊處理，再取出細胞核，這有利于細胞核的一系列變化和細胞融合后______的啟動。

Answer 1

【答案】因為直接導入，目的基因無法在受體細胞中復制增殖和穩定存在 控制質粒DNA轉移的 根據標記基因篩選、DNA雜交技術篩選 接觸抑制 膠原纖維 營養限制性培養（或調節培養基中的牛血清濃度） 基因表達的分子開關

【解析】

1.基因表達載體的構建是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其目的是使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。

2.目的基因的檢測與鑒定的方法：檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，用DNA分子雜交技術；檢測目的基因是否轉錄出了mRNA，用分子雜交技術；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，用抗原-抗體雜交技術。

3.動物細胞培養過程中，細胞進行有絲分裂，數量不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。貼滿瓶壁的細胞需要用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續培養，讓細胞繼續增殖。

（1）將目的基因導入受體細胞時，必須先構建基因表達載體，因為直接導入受體細胞，目的基因無法在受體細胞中復制增殖和穩定存在，不能傳給下一代；促進重組質粒進入受體細胞與質粒上的控制質粒DNA轉移的基因有關，該基因能將插入的目的基因序列轉移并整合到生物的染色體上；檢測目的基因是否導入受體細胞羊胚胎成纖維細胞時，可根據質粒上的抗生素抗性標記進行篩選，也可用DNA分子雜交技術進行篩選，將單鏈的目的基因片段用放射性同位素標記，進行DNA分子雜交。

（2）在動物細胞培養過程中，細胞貼壁生長，數量不斷增多，當細胞生長到表面相互接觸時，往往會發生接觸抑制現象；故需要用胰蛋白酶消化組織細胞中的膠原纖維和細胞外的其他成分，獲得單個的成纖維細胞懸浮液。

（3）③過程表示取出供體細胞核，進一步進行細胞核移植，需要對羊胚胎成纖維細胞進行營養限制性培養（或調節培養基中的牛血清濃度）的特殊處理，再取出細胞核，這有利于細胞核內基因的選擇性表達，即有利于細胞核的一系列變化和細胞融合后基因表達的分子開關的啟動。