Question

【題目】凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離技術，由于設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很好的分離效果，目前已被生物化學，分子免疫學等有關領域廣泛應用。

（1）凝膠色譜法是根據_____________分離蛋白質的有效方法，也稱作_____。

（2）樣品處理中紅細胞的洗滌要使用_____反復沖洗、離心，直到__________， 表明紅細胞已洗滌干凈。實驗流程圖中 A 操作要用到的試劑是_____。

（3）血紅蛋白粗分離階段，透析的目的是_____________。

（4）甲圖中，實驗流程 B 代表_____。進行乙圖操作時，如果_________，說明色譜柱制作成功。其中，C 試劑是_________。

Answer 1

【答案】相對分子質量的大小 分配色譜法 生理鹽水 上清液中沒有黃色 蒸餾水和甲苯 除去小分子雜質 樣品的加入和洗脫 紅色區帶均勻一致地移動 磷酸緩沖液

【解析】

1、血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白。（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。（3）純化：調節緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質。（4）純度鑒定——SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

2、凝膠色譜法（分配色譜法）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內部，路程長，流動慢。

3、據圖A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫。

（1）凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法，也稱作分配色譜法。

（2）樣品處理中紅細胞的洗滌要使用生理鹽水反復沖洗、離心，直到離心后的上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈。實驗流程圖中A血紅蛋白的釋放操作要用到的試劑是蒸餾水和甲苯。

（3）血紅蛋白粗分離階段，透析的目的是除去小分子雜質。

（4）甲圖中，實驗流程B代表樣品的加入和洗脫，進行乙圖操作時，如果紅色區帶，說明色譜柱制作成功。其中，C試劑是20mmol/L的磷酸緩沖液。